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淋巴細(xì)胞分離液使用過程問題解答
更新時(shí)間:2021-07-26   點(diǎn)擊次數(shù):691次
  淋巴細(xì)胞分離液使用過程問題解答
  問題1.淋巴細(xì)胞分離液的溫度對(duì)于分離的影響有多大,有無做過不同室溫溫度及不同液體溫度下的分離效果驗(yàn)證?
  淋巴細(xì)胞分離液由于配制時(shí)的環(huán)境溫度即為20℃±2℃,保證該溫度下分離液密度為1.077±0.001g/mL,分離液的作用原理:密度梯度分離,分離成功的關(guān)鍵即為正確的密度保證。溫度和密度緊密,高溫度下,分離液低密度;低溫度下,分離液高密度,因此建議使用時(shí),樣品和分離液的溫度均應(yīng)為18℃-22℃之間。
  建議: 使用時(shí),環(huán)境、樣品及分離液的溫度控制均應(yīng)在20℃±2℃
  問題2.如何更好的提高血液分離效率,那些因素會(huì)導(dǎo)致提取效率過低?
  影響因素:
  ü樣本新鮮程度:*分離時(shí)間為2h以內(nèi)
  ü血液稀釋比例
  ü所使用離心管直徑高度:分離液和樣本量在管中的高度不得超過管體積的2/3
  ü分離液與樣本的比例:分離液至少得和上樣樣本體積一致,分離液越多越好
  ü血液個(gè)體差異問題
  ü血液及分離液都不要經(jīng)過冷藏及冷凍,且使用時(shí)的溫度在18℃-22℃之間
  離心力及離心時(shí)間
  問題3.每個(gè)客戶的離心機(jī)不同,是否可以使用統(tǒng)一的離心力提取細(xì)胞?如果使用統(tǒng)一的離心力提取淋巴細(xì)胞效果如何?
  因?yàn)檠簜€(gè)體差異粘稠度、采血時(shí)間、血液量等,根據(jù)不同的因素來進(jìn)行調(diào)整??梢越y(tǒng)一離心力,但需根據(jù)個(gè)體差異略有改動(dòng)。
  問題4.有一些的離心機(jī)有升速降速速率調(diào)節(jié),如何來設(shè)定升速降速速率以保證能得到數(shù)量及純度較高的PBMC(舉例)?有一些普通的離心機(jī)沒有升降速速率調(diào)節(jié),PBMC層就就形成得不好,如何解決此類問題?
  建議升速為1min,降速為3min分離效果理想。升降速時(shí)間不包含在離心時(shí)間里。
  問題5.說明書上是針對(duì)骨髓、臍帶血、外周血標(biāo)本,我們?cè)谑褂眠^程中還會(huì)遇到胸腹水、心包積液等體液標(biāo)本,那對(duì)這類標(biāo)本的分離沒有特殊分離要求?
  除血液樣本以外,其他來源樣本首先要富集樣本中的細(xì)胞,要求細(xì)胞懸液濃度控制在2×108-1×109個(gè)/ml,效果*。
  問題6.有一些標(biāo)本本身淋巴細(xì)胞百分比就比較低,如何盡可能的提高得率或是有無方法去除掉一些其他不要的細(xì)胞?
  要選擇合適的試管、樣本要2h以內(nèi)進(jìn)行分離,分離液使用量要多余樣本量,以及離心力、離心時(shí)間、溫度要合適等。
 

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